【產(chǎn)品名稱】
通用名稱：豬乙型腦炎病毒抗體（IgG）診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
英文名稱：Porcine Japanese B Encephalitis Virus Antibody Test Kit （ELISA）, JEV Ab
【包裝規(guī)格】
96×2測(cè)試/盒
【預(yù)期用途】
本試劑盒用于定性測(cè)定豬血清中日本乙型腦炎病毒（又稱流行性乙型腦炎）IgG抗體。用于評(píng)估豬場(chǎng)豬乙型腦炎病毒疫苗免疫狀況，感染豬的血清學(xué)診斷以及豬乙型腦炎病毒病的流行病學(xué)調(diào)查。
【檢驗(yàn)原理】
本試劑盒應(yīng)用固相酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）原理，由包被有高純度的豬乙型腦炎抗原的微孔反應(yīng)板、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗豬IgG及其它試劑配套組成。其反應(yīng)機(jī)理為包被抗原與樣本中的JEV-IgG結(jié)合，再與酶標(biāo)抗豬IgG抗體形成“包被抗原+JEV-IgG+酶標(biāo)抗豬IgG抗體”復(fù)合物，加入顯色劑，通過(guò)酶催化反應(yīng)顯色。顯色深淺與JEV-IgG的量成正比，當(dāng)顯色超過(guò)設(shè)定的臨界值時(shí)結(jié)果判為陽(yáng)性，表明免疫有效或有自然感染。
【主要組成成份】
| 1． | JEV抗原包被板 | 96T×2塊 | 包被有JEV抗原 |
| 2． | 酶標(biāo)記物（黃蓋） | 22ml×1瓶 | 含辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗豬IgG抗體 |
| 3． | 樣本稀釋液（透明蓋） | 50ml×1瓶 | 主要成份為 |
| 4． | 濃縮洗滌液（20×）（白蓋） | 50ml×1瓶 | PBST緩沖液，用前用去離子水20倍稀釋 |
| 5． | JEV-IgG陰性對(duì)照血清（綠蓋） | 1.5ml×1瓶 | 主要成份為JEV-IgG陰性血清 |
| 6． | JEV-IgG陽(yáng)性對(duì)照血清（紅蓋） | 1.5ml×1瓶 | 主要成份為JEV-IgG陽(yáng)性血清 |
| 7． | 顯色劑A（紫蓋） | 12ml×1瓶 | 主要成份為過(guò)氧化脲 |
| 8． | 顯色劑B（黃蓋） | 12ml×1瓶 | 主要成份為TMB |
| 9． | 終止液（藍(lán)蓋） | 12ml×1瓶 | 主要成份為HF |
| 10． | 蓋板膜 | 6張 | |
| 11． | 說(shuō)明書(shū) | 1份 | |
不同批號(hào)的試劑組份不可混用。
【儲(chǔ)存條件及有效期】
于2℃～
【適用儀器】
1．酶標(biāo)儀，單波長(zhǎng)630nm測(cè)量。
2．ELISA用洗板機(jī)。
3．微量移液器。
4．水浴箱或恒溫箱。
5．微量振蕩器。
【樣本要求】
1．本試劑檢測(cè)的樣本為豬血清，樣本應(yīng)無(wú)菌采集，
2．避免使用嚴(yán)重溶血、有沉淀物、含懸浮纖維蛋白及污染長(zhǎng)菌的樣本。
3．樣本中含有常規(guī)用量的EDTA、枸櫞酸鈉或肝素鈉等抗凝劑不影響本實(shí)驗(yàn)。
【檢驗(yàn)方法】
1．加樣：根據(jù)樣本數(shù)量，取所需板條。設(shè)空白對(duì)照1孔（不加任何液體）；設(shè)陰、陽(yáng)性對(duì)照各2孔，分別加入不稀釋的陰、陽(yáng)性對(duì)照血清100ul于相應(yīng)孔中。其余為樣本孔，用樣品稀釋液將待檢樣品40倍稀釋后混勻（如將6μL樣本加到234μL樣品稀釋液中），每孔加入稀釋好的樣本100μL。
2．溫育：加好樣后振蕩10秒，充分混勻，置
3．洗板：甩去孔內(nèi)液體，用洗滌液（濃縮洗滌液用去離子水以20倍稀釋）注滿反應(yīng)板孔，洗滌3次，每次停留3分鐘，zui后一次洗后拍干。
4．加酶：每孔加酶標(biāo)記物100ul，注意：空白孔不加酶標(biāo)記物，也不加其他任何液體。
5．溫育：置
6．洗板：同上洗滌。
7．顯色：每孔加顯色劑A、B各50ul，振蕩混勻，室溫（
8．終止：每孔加終止液50ul，振蕩10秒，充分混勻。終止后10分鐘內(nèi)讀數(shù)。
9．讀數(shù)：用酶標(biāo)儀單波長(zhǎng)630nm以空白孔調(diào)零，讀取各孔吸光度值（A值）。注意：若酶標(biāo)儀讀數(shù)前沒(méi)有以空白孔調(diào)零，則所得的結(jié)果均應(yīng)減去空白孔A值再做判定。
10．結(jié)果判定：
樣品A值大于0.4，判為JEV-IgG陽(yáng)性；樣品A值在0.2到0.4之間，判為JEV-IgG可疑；樣品A值小于0.2，判為JEV-IgG陰性。
陰性對(duì)照血清A值應(yīng)小于0.20，陽(yáng)性對(duì)照血清A值應(yīng)大于或等于0.40，否則試驗(yàn)不成立，需重新試驗(yàn)。
注意：若酶標(biāo)儀讀數(shù)前沒(méi)有以空白孔調(diào)零，則上述所有測(cè)得的結(jié)果均應(yīng)減去空白孔A值再做判定。
【參考值（參考范圍）】
未感染也未免疫豬乙型腦炎疫苗的健康豬群為陰性，A值小于0.2。仔豬因其體內(nèi)含有有母源抗體，其測(cè)定A值可能大于臨界值。
【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
1．嚴(yán)重溶血、血清中纖維蛋白分離不充分、含紅血球、有沉淀物、長(zhǎng)菌的樣本可能導(dǎo)致假陽(yáng)性。
2．因個(gè)體差異或免疫時(shí)間長(zhǎng)短等因素可能會(huì)出現(xiàn)個(gè)別豬只免疫疫苗后檢測(cè)結(jié)果為陰性。
3．陽(yáng)性結(jié)果用于感染豬的血清學(xué)診斷以及流行病學(xué)調(diào)查時(shí)需結(jié)合其他方法和臨床資料進(jìn)行。
【產(chǎn)品性能指標(biāo)】
1．特異性 以本品檢測(cè)30份陰性參比血清不出假陽(yáng)性。
2．敏感性 以本品檢測(cè)30份陽(yáng)性參比血清不出現(xiàn)陰性。
3．精密性 用精密性參比品測(cè)定，CV（%）不高于15%（n=10）。
4．穩(wěn)定性 試劑盒在
【注意事項(xiàng)】
1．本試劑盒僅用于體外診斷。
2．本試劑盒應(yīng)按含有傳染性材料對(duì)待，操作時(shí)需戴手套穿工作衣。
3．實(shí)驗(yàn)廢棄物應(yīng)經(jīng)
4．微孔板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)在室溫中平衡至潮氣干盡后方可拆開(kāi)，未用完的微孔板須放回有干燥劑的鋁箔袋并密封
5．若20倍濃縮洗滌液出現(xiàn)結(jié)晶，屬正?，F(xiàn)象，放置
6．應(yīng)用微量移液器加入樣本及試劑，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性。
7．加洗滌液時(shí)應(yīng)做到滿而不溢，防止孔口有游離酶不能洗凈或各孔間的交叉污染。
8．終止液有腐蝕性，若濺到皮膚或衣物上應(yīng)立即用大量清水沖洗干凈。
